液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用液相色譜原理,主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。它由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過(guò)檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。HPLC廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、藥物研究以及環(huán)境研究中。
液相色譜是應(yīng)用多的色譜分析方法,液相色譜系統(tǒng)由流動(dòng)相儲(chǔ)液體瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄器組成,其整體組成類似于氣相色譜,但是針對(duì)其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn);進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利切換嚴(yán)密;由于液體流動(dòng)相粘度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣體,為了減低柱壓液相色譜的色譜柱一般比較粗,長(zhǎng)度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。HPLC應(yīng)用非常廣泛,幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。
使用液相色譜時(shí),液體待檢測(cè)物被注入色譜柱,通過(guò)壓力在固定相中移動(dòng),由于被測(cè)物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同,不同的物質(zhì)順序離開(kāi)色譜柱,通過(guò)檢測(cè)器得到不同的峰信號(hào),后通過(guò)分析比對(duì)這些信號(hào)來(lái)判斷待測(cè)物所含有的物質(zhì)。液相色譜作為一種重要的分析方法,廣泛的應(yīng)用于化學(xué)和生化分析中。液相色譜從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒(méi)有本質(zhì)的差別,它的特點(diǎn)是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測(cè)器和微粒固定相,適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機(jī)化合物。
液相色譜儀常見(jiàn)故障及應(yīng)對(duì)措施:
1、柱壓高
原因:緩沖液鹽分沉積于柱內(nèi);或者是樣品污染沉積。
措施:如果是緩沖液鹽分沉積于柱內(nèi),則用40~50℃的純水低速正向沖洗柱子,逐漸提高流速?zèng)_洗,柱壓大幅度下降后再用常溫純水清洗,*后用純甲醇沖洗柱子30分鐘。
如果是樣品污染沉積導(dǎo)致,則用純水反向沖洗柱子,再用甲醇沖洗,隨后用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子,再用甲醇沖洗,然后用純水沖洗,*后用甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘。
2、氣泡溢出
原因:主要是由于過(guò)濾器長(zhǎng)期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),內(nèi)部霉菌繁殖形成菌團(tuán)阻塞了過(guò)濾器導(dǎo)致。
措施:將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中,利用超聲清洗既分鐘?;蛘邔⑦^(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小時(shí),再用純水清洗,打開(kāi)purge鍵清洗脫氣,直到?jīng)]有氣泡冒出。打開(kāi)泄壓閥,打開(kāi)泵,純水沖洗過(guò)濾器1小時(shí)左右。
3、無(wú)壓力指示,也無(wú)液體流過(guò)
原因:泵密封墊圈磨損;或大量氣泡進(jìn)入泵體。
措施:更換密封墊圈,或用一個(gè)50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
4、壓力波動(dòng)大,流量不穩(wěn)定
原因:系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物。
措施:觀察流動(dòng)相的量,動(dòng)相要充分脫氣。如果是單向閥和閥座不能密封,則拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
5、峰面積重復(fù)性不佳
原因:進(jìn)樣閥漏液;或加樣針不到位,或者是液量不足。
6、出峰不佳,峰分叉
原因:色譜柱被污染,或者柱頭填料塌陷。
措施:色譜柱被污染則需清洗色譜柱。如果柱頭填料塌陷或硬結(jié),則去除硬結(jié)部分,沖新裝入新填料。反復(fù)滴甲醇,壓緊不銹鋼桿,直至填滿。柱頭用甲醇沖洗干凈。