1.紫外-可見分光光度法工作原理以及相關(guān)應(yīng)用

 

紫外可見分光光度法的工作原理就是利用不同物質(zhì)的 分子在紫外可見光譜區(qū)上的輻射吸收的不同，利用分子的這 一特性來進(jìn)行有效地區(qū)分辨別。紫外可見分光光度法在物質(zhì) 的定性定量分析以及物質(zhì)純度分析物質(zhì)結(jié)構(gòu)分析等多種方 面都有著廣泛的應(yīng)用，起著*的作用。例如：此種檢 測(cè)方法在食品行業(yè)中的運(yùn)用，可以對(duì)食品的質(zhì)量進(jìn)行有效地 安全監(jiān)測(cè)。而對(duì)于生活質(zhì)量方面來說，食品衛(wèi)生及質(zhì)量是 為重要的一點(diǎn)，只有確保食品不會(huì)出現(xiàn)安全問題，才能夠有 效地促進(jìn)國(guó)民健康生活?，F(xiàn)階段，我國(guó)出現(xiàn)的食品安全問題 有以下幾種：食品造假；在食品添加對(duì)人體有害的添加劑； 一些非法添加物的濫用；除了這些主要問題之外還存在食品 殘留農(nóng)（獸）藥、微生物或者重金屬等有害物質(zhì)的情況，以 上情況都會(huì)造成食品出現(xiàn)質(zhì)量安全問題，因此必須對(duì)食品進(jìn) 行安全分析、檢測(cè)，確保食品不會(huì)出現(xiàn)質(zhì)量安全問題。

 

2.紫外可見分光光度計(jì)主要技術(shù)指標(biāo)

 

2.1波長(zhǎng)準(zhǔn)確度及其檢定方法

 

波長(zhǎng)的實(shí)際測(cè)定值和理論值相減，就是紫外可見分光光 度計(jì)的波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度。它在測(cè)試不同的儀器時(shí)，作用非常大， 是非常關(guān)鍵的技術(shù)指標(biāo)。在我國(guó)，計(jì)量檢定工作，波長(zhǎng)準(zhǔn)確 度是很重要的。檢定紫外可見分光光度計(jì)的波長(zhǎng)準(zhǔn)確度有很 多的方式，下面將通過兩種方法進(jìn)行壽命說明：汞燈和氖燈 的利用。

 

汞燈

 

我國(guó)在對(duì)紫外分光光度計(jì)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度進(jìn)行檢定時(shí)，很多 的生產(chǎn)廠一般都廣泛利用汞燈進(jìn)行測(cè)試。具體的操作流程就 是：將原光源拆下來，采用標(biāo)準(zhǔn)燈，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)光源燈各條的特 征譜線進(jìn)行測(cè)試，波長(zhǎng)準(zhǔn)確度就是測(cè)量值和理論值做差。自 利用汞燈進(jìn)行測(cè)試的過程中，能量測(cè)量作為測(cè)量的方式，波 段的范圍設(shè)置在245-560nm范圍之內(nèi)，空氣作為樣品的參考 系，光譜帶的寬設(shè)置為2nm，再通過波長(zhǎng)掃描。波長(zhǎng)準(zhǔn)確度 就是汞燈的各特征波長(zhǎng)的測(cè)量值和其相應(yīng)的理論值之差。為 了確保準(zhǔn)確度，可以重復(fù)進(jìn)行3次，波長(zhǎng)準(zhǔn)確度就選擇3次 的平均值。

 

氖燈

 

在對(duì)紫外可見分光光度計(jì)的波長(zhǎng)準(zhǔn)確度進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，通 常人們?cè)谶x用標(biāo)準(zhǔn)燈時(shí)用氖燈。在儀器紫外區(qū)，由于氖燈的 連續(xù)光譜優(yōu)勢(shì)，就會(huì)在紫外區(qū)作為光源。在可見區(qū)，由于光 譜中波長(zhǎng)為656. 1nm和為486. 0nm是很容易分離的，而且具 有高的強(qiáng)度，譜線特征非常明顯，所以對(duì)儀器波長(zhǎng)準(zhǔn)確度進(jìn) 行檢定時(shí)可以利用譜線。在我國(guó)，對(duì)于儀器進(jìn)行計(jì)量檢定都 會(huì)用波長(zhǎng)準(zhǔn)確度較為高的標(biāo)準(zhǔn)燈-氖燈。

 

2.2波長(zhǎng)重復(fù)性及其檢定方法

 

多次測(cè)試波長(zhǎng)之后數(shù)據(jù)符合程度，也就是多次測(cè)試波長(zhǎng) 的數(shù)據(jù)離散性就是波長(zhǎng)的重復(fù)性 (WavelengthRepeatability)。檢定波長(zhǎng)的重復(fù)性方法，操 作簡(jiǎn)單。種方法，測(cè)試波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度之后，測(cè)試三次取 平均值，波長(zhǎng)重復(fù)性就是通過和3次測(cè)試中小值或者大 值做的差；第二種，測(cè)試波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度，要經(jīng)過3次測(cè)試， 波長(zhǎng)重復(fù)性就是大值與小值之差。

 

2.3光度準(zhǔn)確度及其檢定方法

 

光度的實(shí)際測(cè)定值和理論值之差就是光度準(zhǔn)確度 (PhotoMtricAccuracy)。它倆之間的差越小，測(cè)量就會(huì)更 準(zhǔn)確，光度的準(zhǔn)確度就會(huì)更高。一般，表示紫外可見分光光 度計(jì)光度的準(zhǔn)確度有以下兩種方式：①透射比誤差或者透射 比準(zhǔn)確度（TransmittanceAccuracy)，表示用 TA (或AT); ②吸光度誤差（AbsorbanceError)或者是吸光度準(zhǔn)確度 (Absorbd-nceAccuracy)，在表示用 AA (或AA)時(shí)，要注 意測(cè)量時(shí)具體的吸光度情況。

 

3.紫外可見分光光度法的合理化運(yùn)用 3.1溶液中物質(zhì)含量的測(cè)定

 

應(yīng)用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液和未知液的吸 光度進(jìn)而進(jìn)行比較；也可先測(cè)出不同濃度標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在一定濃度范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線為直線，然后測(cè) 定出未知液吸光度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到其對(duì)應(yīng)濃度。

 

3.2化合物的鑒定

 

用不同波長(zhǎng)的單色光分別通過某一濃度溶液，測(cè)定每一 種單色光的吸光度，之后分別以波長(zhǎng)和分光度作為橫坐標(biāo)和 縱坐標(biāo)，繪制得到吸收光譜曲線。不同食品有其特定的吸收 光譜曲線，借此可以鑒定食品種類。紫外吸收光譜分析主要 用于已知物質(zhì)定量分析，測(cè)定化合物中含有微量的具有紫外 吸收的雜質(zhì)。

 

3.3反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研宄

 

借助于分光光度法可得出特定化學(xué)反應(yīng)速度常數(shù)，借此 從兩個(gè)或兩個(gè)以上溫度條件下的速度數(shù)據(jù)得出反應(yīng)活化能。 3.4絡(luò)合物組成和穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定 金屬離子可與有機(jī)物形成絡(luò)合物且在紫外可見區(qū)有吸 收，據(jù)此可利用分光光度法來研宄其組成。

 

結(jié)語：總之，紫外可見分光光度法是利用物質(zhì)分子對(duì)紫 外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進(jìn)行分析的一種儀器分析，這 種分子吸收光譜產(chǎn)生于價(jià)電子和分子軌道上的電子在電子 能級(jí)間的躍遷。朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律，是分 光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。紫外可見分光光度計(jì)在食 品檢驗(yàn)中應(yīng)用廣泛，主要包括定量、定性和結(jié)構(gòu)分析以及反 應(yīng)動(dòng)力學(xué)和溶液平衡研宄。